赛默飞Veriti96梯度PCR仪做实验时的影响因素有？

　　赛默飞Veriti96梯度PCR仪采用了成熟的帕尔贴技术准确控制升降温度，多重温度探针检测系统，确保每台仪器稳定可靠运行。每一个加热孔都经过准确计算，升温更快，温控更准确，保证实验稳定进行。

　　本产品能够满足实验室的需求和研究者的实验要求，出色地完成普通PCR、梯度PCR、长片段扩增、恒温酶切和连接等实验等试验；同时它还采用简单的操作面板，很好的精度和稳定性保障结果再现，升降温速率快，Z高可达3度/秒，12步梯度选择。

　　使用赛默飞Veriti96梯度PCR仪做实验时有哪些影响因素？

　　1、酶及其浓度

　　目前有两种TaqDNA聚合酶供应，一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U（指总反应体积为100ul时），浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。

　　2、dNTP的质量与浓度

　　dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1MNaOH或1MTris.HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装，-20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等(等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。

　　3、温度与时间的设置

　　基于赛默飞Veriti96梯度PCR仪原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90~95℃变性，再迅速冷却至40~60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70~75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因（长度为100~300bp时）可采用二温度点法，除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸（此温度TaqDNA酶仍有较高的催化活性）。